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ECLSelectLAS500を使ったウェスタンブロッティングの結果およびご感想

ECL Selectを使ってみました。

投稿者 雲のジュウザ
投稿者所属 大学 准教授
投稿日 2012年08月15日
サンプル由来
細胞株
1ウェルあたりのサンプルアプライ量(µg)
15
目的タンパク質の名前
B-23
検出画像へのコメント
1:マーカーは検出されませんでしたが、目的のバンドが綺麗に検出されて満足でした。バックグランドも低くていいです。

検出モード
Manual
露出時間
画像1:1sec

一次抗体
Sigma anti-B-23 mAb
一次抗体の希釈倍率(1:X)
1:1000
二次抗体
HRP-conjugated anti-mouse Ab
二次抗体の希釈倍率(1:X)
1:10000
普段主にお使いの検出試薬
ImmunoStar LD
普段主にお使いの検出手段
LAS 1000 Series
ECLSelectLAS500をお使いいただいた感想など
バックグランドが非常に低くきれいなバンドを検出できました。露光時間も1sと非常に短くてすみました。ただ、マーカーが映るはずなのが映っていないのは何故でしょうか?

 

投稿者 GEヘルスケア
投稿者所属 サポートスタッフ
投稿日 2012年08月20日

ご投稿ありがとうございました (GEヘルスケア)

ECLフォーラムにご投稿いただきまして誠にありがとうございます。
バックグラウンドが非常に低くきれいなバンドを検出できたとのこと、ご期待に沿う結果でしたら幸いです。
ECL Selectは普段ご利用いただいている検出試薬より検出感度が高いので、通常の露出時間よりも短い時間で検出できたと存じます。
1秒ではっきりしたバンドが得られたようでしたら、抗体をさらに数倍希釈してご利用いただいても数分以内の露出時間で検出可能だと予想できます。
抗体のコストセーブにお役立ていただけると幸いです。

マーカーが検出できなかったとのことですが、HRP標識されているマーカーでしょうか。マーカーの種類がわかれば、何か原因がわかるかもしれませんので、よろしければご連絡ください。また、検出画像へのコメントで 1に関してのコメントをいただきましたが、画像1が添付されていないようです。マーカーの種類をご連絡いただく際に併せて画像を添付いただけましたら、こちらでフォーラムにアップロードさせていただきたいと思います。ご不明な点がございましたら、バイオダイレクトライン(03-5331-9336/ Tech-JP@ge.com)
にお気軽にお問い合わせください。今後ともGEヘルスケア・ジャパンをよろしくお願い申し上げます。